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热压法制备浓缩生长因子屏障膜

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导师姓名
王明国
学科专业
口腔医学(专业学位)
文献出处
山东大学   2017年
关键词
浓缩生长因子论文  屏障膜论文  引导骨组织再生论文  血小板生长因子论文
论文摘要

目的:浓缩生长因子是2006年由Sacco发明用于促进软硬组织修复的富有多种特性的新一代血浆提取物,主要为组织工程提供生长因子。但是膜状的CGF不能在诱导骨组织再生手术中充当合格的屏障膜,因为CGF在体内两周内降解。因此并不能为GBR提供足够的时间和空间。本研究通过热压技术提高了膜状CGF的抗溶解性,并通过动物实验证明其能否充当合格的屏障膜,为下一步相应的临床治疗提供实验依据。方法:第一部分制备热压CGF:将离心完成的CGF取出后用干纱布压干放入经过紫外消毒的偏二乙烯薄膜(微波炉保鲜膜)后放于两个已经调好设定温度的热熨斗,加热加压一段时间,制成热压CGF。第二部分体外降解实验:由6个男性成年志愿者在同一天每人采集5个CGF样本。样本根据加热温度和时间分为对照组(未处理CGF)实验组组A1(90℃加热2秒)组B1(90℃加热5秒)组C1(90℃加热10秒)组D1(120℃加热2秒)。将样本放于经过消毒的人工唾液当中并置于37℃水浴中,记录最后降解所需天数。所有数据结果录入spss22.0进行分析,使用单因素方差分析方法并进一步采用Tukey HSD检验行组间两两比,P<0.05为有统计学差异。体内降解试验将12只大白兔分为4组。全麻后在腹部植入CGF膜和热压CGF.分别在第1,2,3,4周处死。将CGF膜连同邻近的结缔组织一同取材后,进行HE以及Masson染色。第三部分生物活性实验:6名男志愿者同一日采集5个样本。将对照组和实验组组A2(90℃加热2秒)组B2(90℃加热5秒)组C2(90℃加热10秒)组D2(120℃加热2秒)放入离心管后加入5ml α-MEM培养液中置于37℃恒温箱中使生长因子释放。在1,7,14,21天抽取其5ml培养液,并更换新5ml培养液。采集的培养液置于-80℃中保存。最后使用ELISA测量PDGF-AB以及TGF-beta的含量。数据进行单因素方差分析并进一步采用Tukey HSD检验行组间两两比较,P<0.05为有统计学差异。第四部分GBR手术:8只新西兰大白兔从颈静脉采血离心后热压获得CGF屏障膜。全麻后,消毒术区,剪毛后沿头皮矢状切开4cm,分离表皮肌肉骨膜。使用6mm直径环锯钻在左右两侧对称制备6mm骨缺损。制备完成后放置β-TCP植骨材料行常规GBR。热压组使用热压屏障膜,胶原膜组使用Lyoplant(?)作为屏障膜,对照组只放β-TCP,空白组不做任何处理。术后每天给予抗感染治疗。在术后第6周,动物安乐死。用牙科高速手机分离颅骨,并将采集后的标本放于4%多聚甲醛固定,并进行Micro-CT及组织形态分析。所有数据结果录入spss22.0进行分析,使用单因素方差分析方法并进一步采用Tukey HSD检验行组间两两比,P<0.05为有统计学差异。结果:1制备热压CGF随着加热温度升高,在时间一定的情况下CGF膜由淡黄变白;在加热温度一定的条件下,时间越长CGF膜由淡黄变白。在90℃加热10秒和120℃加热2秒的条件下CGF膜发生皱缩变硬。2降解实验体外降解实验:对照组和实验组A1,组B1,组C1,组D1标本所需降解时间有差异。体内降解实验:CGF膜在体内2周内完全降解,热压CGF膜可以保持相对完整的形态达3周以上且热压处理后生物相容性并没有丧失。3 ELISA实验对照组在每个时间点上都与实验组均有显著性差异。不论实验组还是对照组都在在第一天释放了大量的生长因子。热压处理90℃处理2s组累计释放了相当于正常CGF 52.20%的PDGF-AB以及62.3%的TGF-β。90℃处理5s组累计释放了相当于正常CGF 45.00%的PDGF-AB以及47.6%的TGF-β。90℃处理10s组累计释放了相当于正常CGF 13.9%的PDGF-AB以及21.3%的TGF-β。120℃处理2s组累计释放了相当于正常CGF 10.6%的PDGF-AB以及21.4%的TGF-β。4 GBR术后成骨情况空白组:缺损区主要由纤维结缔组织构成,缺损周围可见少量新骨生成但未见明显成骨反应。对照组:缺损区成骨活跃,可见缺损周围及远离缺损处均有成骨,但在缺损处可见大量结缔组织侵入胶原膜组:与空白组相比纤维结缔组织侵入较少,在手术边界的植骨材料周围可见新骨形成。在远离手术边界处可观察到钙化骨形成。在植骨材料空泡中可以观察到破骨细胞包绕植骨材料,植骨材料周围形成薄的编织骨,可见形成血管。热压组:与空白组相比纤维结缔组织侵入较少,可在手术边界和远离手术边界处观察到钙化骨组织形成.而且可在植骨材料周围观察到大量的成骨活性,可见大梁编织骨形成。结论:1热压CGF可以显著延长CGF的降解时间2热压CGF具有良好的生物相容性3热压处理的CGF生物活性下降4热压CGF可以充当GBR手术中的屏障膜

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中文摘要

英文摘要

符号说明

前言

第一部分 制备热压CGF及降解实验

材料与方法

结果

第二部分 热压CGF生物活性检测

材料与方法

结果

第三部分 热压CGF用于兔颅骨缺损的修复

材料与方法

结果

讨论

全文总结

附图表

参考文献

发表文章及参与课题

致谢

学位论文评阅及答辩情况表

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