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青岛浒苔完整叶绿体分离及其蛋白质提取方法的初步建立

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文献出处
植物检疫  2013年02期
关键词
浒苔论文  叶绿体论文  蛋白质论文  密度梯度离心论文  提取论文
论文摘要

初步建立青岛海域漂浮浒苔完整叶绿体的分离纯化及其叶绿体蛋白质提取方法,为进一步研究浒苔叶绿体蛋白质组学奠定基础。本研究应用组织研磨结合Percoll密度梯度离心的方法分离出浒苔的完整叶绿体,随后以两种蛋白裂解液配方分别提取叶绿体总蛋白,并通过蛋白定量和两种聚丙烯酰胺凝胶电泳进行比较分析。结果表明:Percoll密度梯度离心的方法能够获得完整且较纯的浒苔细胞叶绿体;含有尿素以及CHAPS的蛋白裂解液抽提的叶绿体蛋白质数量比SDS裂解液更多;相较于普通Tris-SDS-PAGE,采用Tricine-SDS-PAGE电泳系统可以有效分离40kDa以下的小分子叶绿体蛋白质。

论文目录
关闭目录
1 材料和方法
  1.1 样品采集
  1.2 试剂
  1.3 方法
    1.3.1 浒苔叶绿体的分离
      1.3.1.1 组织破碎及叶绿体粗提制品
      1.3.1.2 Percoll梯度离心法纯化完整叶绿体
      1.3.1.3 叶绿体完整率的检测
      1.3.1.4 叶绿素含量测定
    1.3.2 浒苔叶绿体总蛋白提取
    1.3.3 BCA法蛋白定量
    1.3.4 Tris-SDS-PAGE
    1.3.5 Tricine-SDS-PAGE
2 结果与分析
  2.1 浒苔完整叶绿体制备
  2.2 浒苔叶绿体蛋白提取
3 讨论
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