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褐色橘蚜全蛋白双向电泳体系条件优化

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文献出处
植物保护学报  2018年04期
关键词
褐色橘蚜论文  全蛋白提取论文  双向电泳论文  条件优化论文
论文摘要

为优化有效分离褐色橘蚜Toxoptera citricida全蛋白的双向电泳体系,比较了饱和酚抽提法、三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)/丙酮沉淀法、直接裂解液法和Tris-HCl法4种蛋白提取方法,以及蛋白上样量、聚焦条件和固相p H梯度(immobilized p H gradient,IPG)胶条对褐色橘蚜全蛋白双向电泳的影响。结果表明,TCA/丙酮沉淀法和直接裂解液法获得的全蛋白浓度分别为4.25、4.03μg/μL,显著高于饱和酚抽提法和Tris-HCl法,且TCA/丙酮沉淀法所提取的蛋白种类丰富度最高。采用TCA/丙酮沉淀法获得全蛋白,当上样量为100μg时,所得蛋白质点多、分辨率高、背景清晰,除盐3 h,等电聚焦量45 000 V·h,并选用p H 310非线性IPG胶条时,双向电泳图谱中横向拖尾现象少,蛋白点相对清晰,分布均匀。表明所建立的双向电泳体系,结合银染,可从褐色橘蚜全蛋白中识别出1 264个蛋白点,且重复性研究匹配率高,可用于褐色橘蚜蛋白质组学研究。

论文目录
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1 材料与方法
  1.1 材料
  1.2 方法
    1.2.1 褐色橘蚜全蛋白的抽提方法
    1.2.2 褐色橘蚜样品的蛋白含量测定
    1.2.3 蛋白样品的SDS-PAGE电泳
    1.2.4 上样量、等电聚集程度及胶条p H值的优化
    1.2.5 不同抽提方法的蛋白样品双向电泳图谱
    1.2.6 褐色橘蚜全蛋白双向电泳体系重复性验证
  1.3 数据分析
2 结果与分析
  2.1 全蛋白抽提方法的比较和选择
    2.1.1 褐色橘蚜样品蛋白浓度
    2.1.2 蛋白样品SDS-PAGE电泳效果
  2.2 不同上样量对双向电泳的影响
  2.3 不同等电聚焦程序对双向电泳的影响
  2.4 不同p H值的IPG胶条对双向电泳的影响
  2.5 不同抽提方法的蛋白样品双向电泳图谱
  2.6 褐色橘蚜全蛋白电泳体系的重复性验证
3 讨论
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