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补肾健脾活血方含药血清干预过表达、沉默Beclin-1基因的MC-3T3-E1细胞增殖及碱性磷酸酶活性

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文献出处
中国组织工程研究  2021年29期
关键词
细胞论文  慢病毒论文  转染论文  自噬论文  中药论文  碱性磷酸酶论文
论文摘要

背景:成骨细胞是参与骨代谢动态平衡精细调节的重要细胞之一,其功能异常在骨质疏松症发病中极其重要。研究发现自噬基因Beclin-1敲除导致成骨细胞分化和矿化能力下降,提示Beclin-1在骨代谢中具有重要调控作用。目的:补肾健脾活血方含药血清对过表达、沉默Beclin-1基因的MC-3T3-E1细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响。方法:构建Beclin-1过表达及沉默重组慢病毒载体,制备补肾健脾活血方含药血清。将MC-3T3-E1成骨细胞分成6组,分别为空白血清+空病毒组、空白血清+Beclin-1过表达组、空白血清+Beclin-1沉默组、含药血清+空病毒组、含药血清+Beclin-1过表达组、含药血清+Beclin-1沉默组;根据组别不同进行干预,CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶活性。结果与结论:(1)与空白血清+空病毒组比较,含药血清+空病毒组、空白血清+Beclin-1过表达组及含药血清+Beclin-1过表达组的细胞增殖能力和碱性磷酸酶活性均显著增强,空白血清+Beclin-1沉默组、含药血清+Beclin-1沉默组的细胞增殖能力和碱性磷酸酶活性均降低,其中含药血清+Beclin-1过表达组、空白血清+Beclin-1沉默组的变化最明显;(2)空白血清+Beclin-1过表达组和含药血清+Beclin-1过表达组处于G2/M期的细胞比例较高;空白血清+空病毒组、空白血清+Beclin-1沉默组和含药血清+Beclin-1沉默组处于G0/G1期的细胞比例较高;空白血清+Beclin-1过表达组和含药血清+空病毒组处于S期的细胞比例较高;(3)结果表明,过表达Beclin-1、补肾健脾活血方含药血清可提高MC-3T3-E1细胞增殖能力及碱性磷酸酶活性,尤其二者同时干预时作用最强,而沉默Beclin-1则降低MC-3T3-E1细胞增殖能力及碱性磷酸酶活性,补肾健脾方含药血清在某种程度上可抑制Beclin-1沉默的不良影响。

论文目录
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文题释义:
0引言Introduction
1 材料和方法Materials and methods
  1.1 设计
  1.2 时间及地点
  1.3 材料
    1.3.1 实验动物及细胞
    1.3.2 实验药物
    1.3.3 实验试剂和仪器
  1.4 实验方法
    1.4.1 制备含药血清
    1.4.2 目的基因重组慢病毒载体构建
    1.4.3 MC-3T3-E1成骨细胞培养
    1.4.4 慢病毒感染细胞构建稳定表达细胞系
    1.4.5 含药血清干预
    1.4.6 细胞增殖检测
    1.4.7 细胞周期检测
    1.4.8 碱性磷酸酶活性检测
  1.5 主要观察指标
  1.6 统计学分析
2 结果Results
  2.1 各组MC-3T3-E1成骨细胞的增殖情况
  2.2 各组MC-3T3-E1成骨细胞的细胞周期
  2.3 各组MC-3T3-E1成骨细胞的碱性磷酸酶活性
  2.4 生物相容性
3 讨论Discussion
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