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草鱼呼肠孤病毒衣壳蛋白VP7真核重组质粒的构建及免疫效果评价

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文献出处
水生生物学报  2015年04期
机 构
浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室
基 金
浙江省科技厅重大科技专项重点农业项目(2012C12009-4),湖州市科技攻关计划项目(2011GG11),浙江省公益技术研究农业项目(2012C22046)资助
关键词
草鱼呼肠孤病毒论文  衣壳蛋白论文  真核表达论文  体液免疫论文  细胞免疫论文
论文摘要

为研究开发草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)基因疫苗,以编码其主要衣壳蛋白VP7的序列为靶基因,克隆构建了真核表达重组质粒p EGFP-N1-VP7。用脂质体法将其转染真核细胞COS-1和CIK进行瞬时表达,荧光显微镜观察及特异性RT-PCR检测结果表明,成功转染并得到了高效表达。大量扩增重组菌,提取并制备重组质粒p EGFP-N1-VP7,肌肉注射免疫(20±5)g的健康草鱼,重组质粒按0.5和5μg分为2组,同时设5μg空载体组及对照组。免疫草鱼22d后,检测草鱼肠、外周血、肾脏、脾脏的呼吸暴发活性及淋巴细胞的增殖反应;免疫草鱼21d、28d、35d、42d、56d、70d、84d和98d后,分别尾静脉采血并分离血清,用双抗体夹心ELISA方法进行抗体水平的测定。结果表明,构建的含VP7蛋白的核酸疫苗既可诱导草鱼的细胞免疫,又可诱导特异性体液免疫,具有明显的免疫应答作用。按照每尾0.5μg重组质粒的剂量免疫草鱼后35d进行攻毒,免疫保护率达到67%,此研究为GCRV基因疫苗的研制提供了实验资料。

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