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转HBsAg基因樱桃番茄组培苗叶片总蛋白双向电泳体系的建立

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文献出处
核农学报  2012年08期
关键词
双向电泳论文  转基因植物论文  口服植物疫苗论文  蛋白组论文  组培苗论文
论文摘要

建立转乙肝表面抗原(HbsAg)基因樱桃番茄组培苗叶片的蛋白质组双向电泳体系,为转基因番茄的蛋白质组学研究提供技术参数。比较转HBsAg基因的樱桃番茄与野生型在不同蛋白裂解液、不同蛋白上样量及不同等电聚焦程序下,叶片总蛋白的双向电泳结果差异。以裂解液Ⅲ制备叶片总蛋白,采用一向13cm、pH3-10L IPG胶条,二向12.5%的SDS-PAGE凝胶,单次上样120μg叶片总蛋白,聚焦程序Ⅲ,银染时,可以得到最理想的双向电泳分析结果。在此操作程序下,野生型樱桃番茄叶片蛋白双向电泳最多可识别699个蛋白点,而转基因型樱桃番茄叶片蛋白双向电泳最多可识别545个蛋白点,其中有368个点匹配,选取丰度百分比差异2倍以上蛋白点25个进行质谱鉴定,16个蛋白点成功鉴定。本研究建立的转HBsAg基因番茄植株叶片总蛋白的双向电泳体系可为以番茄试管苗为材料进行的蛋白质组学研究提供技术支持。

论文目录
关闭目录
1 材料与方法
  1.1 材料
  1.2 试剂与设备
  1.3 番茄叶片总蛋白提取
  1.4 蛋白质裂解与含量测定
  1.5 双向凝胶蛋白电泳
  1.6 凝胶染色及分析
2 结果与分析
  2.1 不同裂解液提取蛋白的差异比较
  2.2 等电聚焦电泳 (IEF) 条件的探讨
  2.3 不同蛋白上样量的比较
  2.4 蛋白差异分析
3 讨论
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