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两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳分离效果的影响

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文献出处
南方医科大学学报  2007年01期
机 构
南方医科大学病理学教研室,武警医学院病理学教研室,南方医科大学教育部和广东省共建重大疾病转录组学及功能蛋白质组学重点实验室,广东省分子肿瘤病理重点实验室,教育部和广东省共建重大疾病转录组学及功能蛋白质组学重点实验室,广东省分子肿瘤病理重点实验室,广东广州510515,教育部和广东省共建重大疾病转录组学及功能蛋白质组学重点实验室,广东省分子肿瘤病理重点实验室,天津300162
基 金
国家重点基础研究发展规划973项目(2001CB510207),广东省科技重大专项(2003A308401)~~
关键词
人血清蛋白质论文  样品制备论文  双向凝胶电泳论文  蛋白质组论文
论文摘要

目的评价两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)分离效果的影响,建立高分辨率、高重复性的血清2-DE图谱,为鉴定疾病相关血清蛋白质奠定基础。方法分别用热SDS法和直接溶解法处理大肠癌血清样品,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离总蛋白质,图像软件分析后,对其中3个差异蛋白质点行基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱鉴定。结果应用热SDS法处理血清总蛋白质进行双向电泳,可获得分辨率高、重复性好的人血清双向电泳图谱。对直接溶解和热SDS法处理的蛋白样品进行3次重复性检测,凝胶的平均蛋白质点数为675±46和702±49,平均匹配点数为573±42和623±52,匹配率为85.3%和89.6%,分析3块不同胶间蛋白质点在IEF方向的位置偏差为(0.85±0.30)mm和(0.81±0.28)mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(1.02±0.18)mm和(0.97±0.12)mm。热SDS处理的2-DE胶蛋白质点质谱可获得高质量质谱图,并可以检测到相对低丰度的血清蛋白质。结论热SDS法是一种更有效的血清蛋白质样品制备方法,我们利用热SDS法处理血清样品建立了分辨率较高且重复性好的人血清蛋白质双向凝胶电泳图谱。

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