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沙漠小球藻的蛋白双向电泳分析

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文献出处
西北植物学报  2016年09期
关键词
小球藻论文  双向电泳论文  提取法论文
论文摘要

为建立适用于小球藻(Chlorellasp.TLD6B)蛋白质组分析的双向电泳体系,该研究比较了TCA/丙酮沉淀法和Trisol提取法对小球藻蛋白的提取效果,不同pH梯度IPG胶条(pH310和pH47)、不同蛋白质上样量、不同聚焦程序对小球藻蛋白的分离效果。结果表明:(1)采用Trisol提取法可获得较高纯度蛋白,当选择24cm pH 310的线性IPG胶条时,上样量为500μg,聚焦80 000Vh效果最佳,可分辨蛋白点达726个;当选择24cm pH 47的线性IPG胶条时,上样量为1 000μg,聚焦80 000Vh效果最佳,可分辨蛋白点达1 230个。(2)该实验随机挑选了10个胶内蛋白点进行MALDI-TOF/TOF-MS鉴定分析表明,其中8个蛋白点鉴定成功,进一步说明Trisol提取法可适用于小球藻双向电泳分析。

论文目录
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1 材料与方法
  1.1 材料
  1.2 实验方法
    1.2.1 蛋白质提取
    1.2.2 蛋白样品的裂解及定量
    1.2.3 SDS-PAGE蛋白电泳
    1.2.4 双向电泳
    1.2.5图像扫描与分析
    1.2.6 挖点及胶内酶解与质谱分析
2 结果与分析
  2.1 不同蛋白质提取方法的比较分析
  2.2 不同蛋白上样量的双向电泳结果比较
  2.3 不同聚焦程序的双向电泳结果比较
  2.4 小球藻蛋白的质谱分析鉴定
3 讨论
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