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蜂蜜蛋白提取以及双向电泳技术分析蜂蜜蛋白条件优化

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文献出处
安徽农业科学  2016年03期
关键词
蜂蜜蛋白论文  双向电泳论文  蛋白提取论文
论文摘要

[目的]研究蜂蜜中蛋白质提取的有效方法,优化蜂蜜蛋白电泳条件。[方法]该试验使用丙酮、钨酸钠、硫酸铵、尿素-硫脲4种方法提取蜂蜜中的蛋白并进行比较,然后进行双向电泳分析,对影响双向蛋白电泳的IPG胶条的选择、蛋白质上样量、等电聚焦时间等主要因素进行优化。[结果]试验表明,采用硫脲法提取蜂蜜蛋白获得的蛋白含量最高,硫脲法和丙酮沉淀法获得的蛋白纯度最好,而硫脲法因干扰物质较少、易于裂解适于双向电泳技术,采用硫脲法提取的蜂蜜蛋白选择IPG胶条p H 58,蛋白上样量为150μg,等电聚焦时间达到32 000 V·h的情况下能充分地聚焦,获得的双向电泳图谱最佳,优化后的洋槐蜜双向电泳图谱上可检测到326个蛋白点,重复性和分辨率均较好。[结论]蜂蜜类含糖样品中使用硫脲法提取蛋白能减少糖类物质干扰。

论文目录
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1 材料与方法
  1.1材料
  1. 2 蜂蜜总蛋白提取方法比较
    1.2.1 TCA丙酮法
    1.2.2钨酸钠沉淀法
    1.2.3硫酸铵盐析法
    1.2.4尿素-硫脲法
  1.3蜂蜜总蛋白含量的测定
  1.4蜂蜜蛋白2-DE条件优化
    1.4.1第一向IEF等电聚焦IPG胶条的选择
    1.4.2蛋白质上样量优化
    1.4.3等电聚焦参数的设置
2 结果与分析
  2.1比较4种蜂蜜蛋白提取方法
  2. 2 蜂蜜蛋白2-DE条件优化
    2.2.1第一向IEF等电聚焦IPG胶条的选择
    2.2.2蛋白质上样量
    2.2.3等电聚焦参数的设置
3 结论与讨论
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